Фосфолипаза D1 активирует NAD-киназу в нейтрофилах человека и обеспечивает NADP⁺ для образования NET
В изолированных нейтрофилах человека липиды, которые образует фосфолипаза D1, активируют NAD-киназу и повышают уровень NADP⁺, нужного для выброса NET, сообщили авторы.
Исследователи описали липид-зависимый путь, который снабжает нейтрофилы человека NADP⁺ при образовании нейтрофильных внеклеточных ловушек (NET), говорится в работе в Nature Communications. С помощью липидомных, биохимических и функциональных экспериментов на нейтрофилах человека они определили NAD-киназу, единственный фермент синтеза NADP⁺, как прямую мишень липидов, образующихся ниже по пути фосфолипазы D1 (PLD1) nature.com
Nature Communicationsnature.comОткрыть источник ↗.
Перестройка липидов после активации
NET — сетевидные структуры из деконденсированного хроматина, покрытого антимикробными белками, которые захватывают и убивают патогены. Их образование зависит от активных форм кислорода, которые вырабатывает NADPH-оксидаза NOX2; ей нужна постоянная регенерация NADPH из NADP⁺, главным образом через окислительный пентозофосфатный путь. Как регулируется синтез NADP⁺ в активированных нейтрофилах, оставалось плохо изученным.
Команда стимулировала нейтрофилы трёх доноров форболмиристатацетатом (PMA) в течение 30, 60 или 180 минут и анализировала лизаты клеток масс-спектрометрией. Фосфатидная кислота (PA) составляет около 0,1 % липидома нестимулированных клеток, но после 30 минут действия PMA её уровень вырос более чем в 10 раз. Фосфатидилглицерин, диацилглицерин, триацилглицерин, лизофосфатидилэтаноламин, лизофосфатидная кислота, церамиды и фосфатидилинозитол также увеличились, но в меньшей степени. Авторы также сообщают о росте PI(4,5)P₂ (PIP₂) и утверждают, что PA, образованная PLD1, стимулирует его синтез, повышая активность фосфатидилинозитол-4-фосфат-5-киназы.
PLD1, NAD-киназа и NADP⁺
По данным авторов, PA и PIP₂ связываются с NAD-киназой и активируют её. Образовавшийся в цитозоле NADP⁺ восстанавливается до NADPH в окислительном пентозофосфатном пути и расходуется NOX2 при образовании NET nature.com
Nature Communicationsnature.comОткрыть источник ↗.
Фармакологическое или генетическое нарушение работы PLD1 подавляло активность NAD-киназы, истощало NADP⁺ и снижало образование NET. Авторы указывают, что этот эффект не был связан с прямым ингибированием NADPH-оксидазы. Выброс NET оценивали по внеклеточной ДНК, которую измеряли непроникающим в клетки красителем SYTOX Green после предварительной инкубации клеток с ингибиторами.
В клетках млекопитающих PA образуют четыре группы ферментов: фосфолипаза D, диацилглицеролкиназа, NAPE-специфичная фосфолипаза D и глицерол-3-ацилтрансферазы. В работе использовали ингибиторы этих путей; ацилтрансферазы напрямую не ингибировали, вместо этого применили ингибитор синтазы жирных кислот, поскольку этот фермент поставляет им жирные кислоты. Авторы описывают результат как липидно-метаболическую ось, связывающую перестройку мембран под действием PLD1 с доступностью NADP⁺ и функцией врождённого иммунитета.
