# Векторы CRISPR-Cpf1 доставляют до десяти гидовых РНК и дают тройную делецию генов у Aspergillus niger за две недели

- Опубликовано: 2026-11-15 04:44 UTC
- Раздел: Жизнь и здоровье › Биотехнологии
- Теги: Aspergillus niger, CRISPR Cas12a, векторы Cpf1, мультиплексное редактирование генома, массив гидовых РНК, делеция генов, грибная клеточная фабрика, нитчатые грибы
- Адрес: https://realtech.media/ru/news/rt-9e80848a7549bd652d1cb157_vektory_crispr_cpf1/

**Набор для Aspergillus niger собирает плазмиды с числом гидовых РНК до десяти. Три гена удалили одновременно менее чем за две недели, что может ускорить создание грибных клеточных фабрик.**

![CRISPR-Cpf1 vectors deliver up to ten guide RNAs and enable triple gene deletions in Aspergillus niger in two weeks](https://realtech.media/media/2026/11/bfeabd363d68f583.jpg)
*bioengineer.org*

Исследовательская группа описала набор инструментов CRISPR-Cas12a (Cpf1) для мультиплексного редактирования генома нитчатого гриба Aspergillus niger. По данным журнала «Fungal Biology and Biotechnology», плазмиды способны доставлять до десяти гидовых РНК (gRNA), а три гена удалили одновременно без предварительной проверки gRNA и без интегрированных в геном маркеров отбора [1]. Авторы сообщают, что несколько модификаций выполняются менее чем за две недели [1].

Виды Aspergillus используются в промышленности более века: для пищевых ферментаций, получения лимонной кислоты и ферментов, например амилаз. Создание эффективных грибных клеточных фабрик требует множества штаммоспецифичных модификаций, а традиционные схемы опираются на последовательные раунды трансформации и рециклинг маркеров, из-за чего проекты могут растягиваться на годы.

## Почему Cpf1 упрощает доставку гидов

В отличие от Cas9, Cpf1 высвобождает несколько gRNA из одной РНК-предшественницы с помощью собственной РНКазной активности [1]. Он узнаёт и разрезает консервативную шпильку из 14–16 нуклеотидов внутри повтора crRNA длиной 19–20 нуклеотидов. Это устраняет необходимость в рибозимах и элементах процессинга тРНК, чьи повторяющиеся последовательности в грибах усложняют сборку плазмид и могут вызывать нестабильность из-за рекомбинации прямых повторов. Кроме того, каждый локус можно нацелить несколькими gRNA, повышая вероятность разрыва ДНК [1].

Плазмиды содержат последовательность AMA1 для внехромосомной репликации и четыре маркера отбора: pyrG, argB, hph и ble. Cpf1 кодируется кодон-оптимизированным геном бактерии Lachnospiraceae с сигналом ядерной локализации. Кассета гидов экспрессируется с промотора U3 Aspergillus fumigatus и собирается методом USER-клонирования из ПЦР-фрагментов и синтетических двухцепочечных олигонуклеотидов, названных bio-blocks. Кассеты с девятью–десятью гидами подтвердили колониальной ПЦР и секвенированием по Сэнгеру после скрининга пяти–десяти бактериальных трансформантов.

## Тройные делеции в штамме NIG159

Редактирование проверяли в штамме NIG159 с делецией kusA, который не способен репарировать двунитевые разрывы негомологичным соединением концов. Без донорных матриц клетки не выживали, что подтвердило активность нуклеаз, высвобождаемых векторами. Донорные субстраты с плечами гомологии по 500 пар оснований использовали, чтобы одновременно вырезать около 300 пар оснований вокруг стартового кодона трёх генов. Каждый ген нацеливали тремя неохарактеризованными gRNA, полагаясь на избыточность, а не на предварительную проверку.

В первом эксперименте, Gene Set 1, три неохарактеризованных гена (A, B и C) нацеливали с помощью плазмиды pCpf1.MEC1 с маркером pyrG. Авторы заключают, что система эффективна для построения векторов CRISPR-Cpf1 со множеством gRNA, и ожидают значительного ускорения создания клеточных фабрик [1].

## Источники

1. [Fungal Biology and Biotechnology](https://doi.org/10.1186/s40694-025-00196-7)
2. [bioengineer.org](https://bioengineer.org/crispr-cas12a-vectors-enable-simultaneous-multi-gene-deletions-in-aspergillus-niger-strains)

---

Источник: RealTech, realtech.media — https://realtech.media/ru/news/rt-9e80848a7549bd652d1cb157_vektory_crispr_cpf1/